中国林蛙的雌性诱变技术

中国林蛙的经济价值主要体现在雌蛙的输卵管，雌蛙输卵管的风干品，即哈士蟆油，是一种珍贵的滋补品，有“软黄金”之称。在南方，由于繁殖季节温度相对偏高，会导致中国林蛙胚胎的生殖腺向雄性方向分化，导致雄性比例偏高，因此中国林蛙南方养殖的雌性化问题就显得更加关键。1.原理中国林蛙在胚胎发育初期性腺并没有分化，当胚胎发育到一定阶段，其原生殖细胞向雌性和雄性两个方向分化。中国林蛙胚胎的生殖腺由皮质、髓质和原生殖细胞三个主要部分组成。如果原生殖细胞进入生殖腺皮质部分，生殖腺向雌性方向分化；如果原生殖细胞进入生殖腺髓质部分，生殖腺则向雄性方向分化。在性腺分化的关键时期，通过激素诱导或改变环境温度，均可促使其生殖腺向某一性别方向发育，并永久保持这一性别特征，而且不影响繁育后代。笔者在实验中发现，在一定时期施加一定浓度的激素可以提高雌性中国林蛙的比例，一般可以达到70%～85%。在变态初期对幼蛙进行比较发现，施加性激素的中国林蛙明显比没有加性激素的中国林蛙强壮。2.雌性诱变方法目前中国林蛙雌性诱变的方法主要有两种，一种是控温法，另一种是性激素诱导法。其中控温法比较安全，经济实惠，但是不易操作，雌性诱变率不稳定。与控温法相比，激素诱导法比较容易操作，雌性诱变率又比较稳定，但是从长远考虑，激素诱导法对中国林蛙的品质可能会造成影响。(1)控温法：即通过控制蝌蚪养殖期的水温来调节中国林蛙雌性个体的比例。在中国林蛙生殖腺分化期间，温度对生殖腺的分化发育的方向有明显影响。温度高，生殖腺向雄性分化发育的比例比较高；温度低，生殖腺向雌性分化发育的比例较高。在蝌蚪生长发育期间，特别是在缓慢生长期和变态期，将日最高水温控制在13～18℃，即可诱导生殖腺向雌性方向分化，达到提高雌性个体比例的目的，一般雌性个体可达70%左右。控温法有以下几种：①调节水位和光照：调节水位和光照是控温的有效手段，可以采取遮光、提高水位等措施来降低水温以达到控温要求。通过这种方法可以将水温控制在高于日最低气温3～4℃的水平。②调节产卵时间：通过人工催产来改变中国林蛙产卵时机，让中国林蛙提前产卵，具体产卵时间可以根据当地的气候条件而定。在江南一带，一般4月上旬以前水温很少超过20℃，因此可以通过人工调控，让中国林蛙2月份产卵，3～4月份变态，以充分利用自然的温度条件进行雌性诱导。③用深井水降温：在蝌蚪期进行性诱变时，如水温超过20℃，有条件的可利用深井水来降温。白天水温高时不断加入井水并排出池水，即可达到降温的目的。利用井水时，最好事先对井水进行检测，以确保蝌蚪安全。（2）激素诱导法：即利用雌性激素来诱导中国林蛙的生殖腺向雌性方向分化发育。雌性激素属于固醇类激素，不溶于水，因此用药时要用酒精来溶解。另外激素的作用效力很高，在用药时一定要注意用药量，用药量过大会导致中国林蛙发育畸形。①用药时机：在中国林蛙的卵团胚胎发育至尾芽期生长过程中开始用药。②药物：雌性激素类药物种类很多，有雌二醇、雌三醇、雌酚片、雌烯酚、孕酮等多种，其中每一种又包括多种结构不同的成分，如雌二醇就有苯甲酸雌二醇、戊酸雌二醇、β-雌二醇等多种。因此在选择雌性诱变剂时要科学合理，并非只要是雌性激素就可以使用。另外，近年来笔者在研究中发现，几种雌性激素类药物合理配比使用效果最佳。③给药方式药饵：尾芽期用药后，到了蝌蚪取食期，也可将激素混拌到饵料中投喂。在制作药饵时，要将药物和饵料充分混合。另外要注意用药量，过多会导致发育畸形，药量不够则起不到诱变的效果。水体给药：即将药物溶解后直接喷洒到养殖池中。水体给药法的吸收效果不如药饵好，但是这种给药方法药效持续时间相对要长一些。